DNA测序(DNA sequencing,或译DNA定序)是指分析特定DNA片段的碱基序列,也就是腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)与鸟嘌呤的(G)排列方式。快速的DNA测序方法的出现极大地推动了生物学和医学的研究和发现。
在基础生物学研究中,和在众多的应用领域,如诊断,生物技术,法医生物学,生物系统学中,DNA序列知识已成为不可缺少的知识。具有现代的DNA测序技术的快速测序速度已经有助于达到测序完整的DNA序列,或多种类型的基因组测序和生命物种,包括人类基因组和其他许多动物,植物和微生物物种的完整DNA序列。
利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物,直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP),并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团,使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止。终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调整,使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。它们具有共同的起始点,但终止在不同的的核苷酸上,可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段,凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。
DNA常规测序 | 复杂结构测序 | 噬菌体测序 | Primer Walking |
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对于常规的未知浓度的测序样品,您可以选择此项服务。 样品的类型包括质粒、PCR产物(已纯化PCR或无杂带的PCR原液)、菌体(平板克隆或甘油菌)、具有环状基因组的噬菌体(上清液或噬菌斑)。
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由于二级结构或者其它内在因素的影响,复杂结构对于测序是巨大的挑战。常规的测序方案往往容易出现提前中断或者测序结果紊乱的现象。 以下几种序列特点的样品适合针对复杂结构的测序方案: 高GC含量:GC含量>60%的模板,或者局部高GC含量的模板 发夹结构:包含两个反向重复序列,两个重复序列之间间隔至少3个碱基 重复序列:2个或3个碱基的多个连续重复。 DNA发卡结构及RNAi 模板测序 RNA干扰(RNAi)是指双链RNA(dsRNA)介导的特异性抑制某相关基因表达的一种机制。它逐渐发展为一种研究基因功能的快速有效的新兴技术。 RNAi模板,由于其存在 “发卡结构”,给测序工作带来了很大挑战。在RNAi研究中采用的小发卡RNA(shRNA)通常无法测序成功,测序结果往往提前中断或者信号紊乱。强耀生物拥有专门针对shRNA模板的测序方案,测序结果得到客户的一致认可。 |
强耀生物的测序方案可以对环状基因组的噬菌体(噬菌体上清或者噬菌斑)直接测序。当难以获得足够量的测序用噬菌体DNA样品时,该操作为您省掉DNA制备的繁琐过程,并能获得高质量的测序结果。 本项服务包括: ·节约时间和成本-无需菌液培养和DNA制备 ·ABI3730xl DNA序列分析仪进行序列分析 ·Phred20有效长度大于600bp ·免费提供强耀生物通用引物 ·您可以选择在线提交订单,强耀生物CLIMS系统将长期保存您的订单信息以及测序结果: ·强耀生物的技术支持会针对项目中的问题及时与您沟通 |
强耀生物可以通过Primer Walking测序,帮助您获得未知克隆的序列信息,或者验证克隆序列的准确性。如果您提供参考序列,我们可以一次完成长片段克隆的全长测序。 本项服务包括: ·引物设计并合成 ·根据序列图谱进行人工编辑 ·序列拼接 ·发送拼接序列结果 |