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Q
抗原多肽选择的基本原则有哪些?
抗原多肽选择的基本原则有(1)尽可能是在蛋白表面;(2)保证该段序列不形成α-helix; (3)N,C端的肽段比中间的肽段更好;(4)避免蛋白内部重复或接近重复段的序列;(5)避免同源性太强的肽段;(6)交联可以交联在N、C两端,选择依据就是交联在对产生抗体不太重要的一端;(7)序列中不能有太多的Pro,但有一两个Pro有好处,可以使肽链结构相对稳定一些,对产生特异性抗体有益。
Q
抗原多肽设计应满足什么条件?
为了使生产抗体获得最佳效果,仔细地设计抗原多肽是很有必要的,设计应满足一个基本条件:在免疫过程中,该抗原既不会产生过强的免疫反应,同时又能产生出对感兴趣的蛋白有结合能力的抗体。
Q
抗原多肽的序列长度是多少才合适?
通常我们建议抗原多肽的序列长度在8-20个氨基酸残基之间,如果太短,就有多肽太特殊、所产生的抗体与天然蛋白之间的亲和力(结合能力)不够强的风险,同样,如果序列长度超过20,将有可能引入二级结构,所产生的抗体失去特异性的可能,而且肽链越长,通常合成难度增大,不易获得高纯度的产品。
Q
通常是选择蛋白的N端还是C端来制备抗体?
为了避免识别区域隐藏在蛋白内部的风险,我们通常建议选择蛋白的N,C两端来产生的相应的抗体。因为在完整的蛋白中,N,C两端通常是暴露在蛋白表面的。然而,一定要注意膜蛋白的C端疏水性太强,不适合作为抗原。
Q
可以使用肽抗原作为阳性对照在蛋白质印迹中测试抗血清吗?
肽抗原(未结合)的分子量 (MW) 太小,无法用于传统的蛋白质印迹 (WB) 测试。为了验证 WB 中目标条带的特异性,建议运行“抗体阻断”对照,使用肽抗原阻断一抗。推荐的出血稀释度为 1:1000(等于 1µg/ml),封闭肽约为 2µg/ml。
Q
如何定义优质抗体?
优质抗体是一种具有适当灵敏度和特异性的抗体,能够回答您的检测提出的问题。此外,一种抗体不一定适用于所有应用,因为每种应用都有不同的性能规格。
Q
如何确定是要选择单克隆抗体还是多克隆抗体?
多克隆抗体和单克隆抗体都有各自的优势。一般来说,单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高。与单克隆抗体相比,大量多克隆抗体的生产相对快速且成本低廉,它们是非特异性的,因为它们能够识别任何一种抗原上的多个表位。
Q
强耀生物是否为客户的定制单克隆抗体服务提供任何保证?
对于合格的蛋白抗原,强耀可以保证针对免疫原的两个ELISA和WB阳性克隆。对于合格的肽抗原,强耀可以保证两个阳性克隆,针对免疫原的ELISA结果为阳性。对于其他情况,强耀将根据免疫后的免疫反应提供保障。
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