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大肠杆菌蛋白表达系统是一种常用的生物技术手段,用于在大肠杆菌细胞中表达外源蛋白质,该载体包含适当的启动子和调控序列,用来控制目标蛋白质的表达水平,该系统主要包括以下步骤:


大肠杆菌蛋白表达


1.  克隆外源基因:将要表达的外源基因克隆至适合大肠杆菌表达的载体中,通常是质粒,载体包含启动子,转录终止子和选择标记等元件;

2、转化大肠杆菌:将重组的载体导入大肠杆菌内,并使其稳定地继承到细胞内;

3、培养:将筛选出的细胞培养在含有适当培养基的培养条件下,以促进蛋白表达;

4、诱导表达:在培养过程中,添加适当的诱导剂(如IPTG)来激活启动子,刺激体内的传导子启动表达过程;

5、收获蛋白:通过破细胞壁等方法收获蛋白质;

6、纯化:使用各种蛋白纯化技术,例如亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤等来获得纯化目标蛋白。


该系统的优点是表达效率高、成本低、操作简便。缺点是存在蛋白质降解、折叠不正常等问题,需要通过优化表达条件等方法提高表达质量。

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