免疫荧光技术是将荧光素如异硫氰酸荧光素(FITC)与相应抗体(或抗原)以化学的方法结合,将荧光标记抗体(或抗原)与标本中相应的抗原结合形成荧光标记的抗体- 抗原复合物,用荧光显微镜观察。在镜下见到有荧光存在即推断有抗原抗体复合物的存在,根据已 知的抗体(或抗原)即可推知另一个未知抗原(或抗体)的存在,那么荧光素FITC标记抗体的方法有哪些呢?今天小编在下面给大家做详细的解答。
一:直接免疫荧光法
直接免疫荧光法是利用荧光色素标记的特异性抗体直接与相应的抗原结合,以鉴定未知抗原。本法具有操作简单、时程短、特异性高的优点,但也存在缺点如不能检查抗体,敏感性较差等;
二:间接免疫荧光法
间接免疫荧光法以荧光素标记抗球蛋白抗体,抗体与相应抗原结合后,荧光标记的抗球蛋白抗体与已结合的抗体发生作用,从而推知抗原或抗体的 存在。间接荧光技术可以用已知的抗原检测未知的抗体,也可用已知的抗体测出未知抗原。
当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时,主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合,形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。
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