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日常表达纯化蛋白时,蛋白纯度总是备受关注,很多客户都关心蛋白纯度能否达到90%以上。




在实际产品交付中,我们交付的蛋白纯度一般在85%以上。但如果客户明确要求要提高合成蛋白的纯度至90%以上,可采取以下几种策略:

1. 多步纯化方法:通过组合使用不同的分离纯化方法,如离子交换层析、亲和层析、凝胶过滤层析等,可以有效提高蛋白的纯度。每种方法都有其独特的优势,通过优化这些方法的组合,可以达到更高的纯度。


2. 使用高效纯化柱:更换纯化柱,例如使用His纯化柱,可以显著提高蛋白的纯度。一些高效纯化柱设计用于快速操作,并能实现高容量和高纯度的蛋白纯化。


3. 优化纯化条件:调整裂解、结合缓冲液、洗涤缓冲液和洗脱缓冲液的组分、pH值和咪唑浓度等参数,以确保在纯化过程中最大限度地保留目标蛋白并去除杂质。


4. 自动化纯化系统:采用全自动蛋白质纯化系统,可以减少人为误差,提高纯化效率和纯度。这种系统通常能够处理多个样品,从而提高整体纯化效率。


5. 色谱技术:利用色谱技术,如高效液相色谱(HPLC)、离子交换色谱和亲和色谱等,可以逐步提高蛋白的纯度。这些技术可以根据蛋白质的特定性质(如分子大小、电荷和亲和性)进行分离。


6. 优化表达条件:在蛋白表达阶段,通过调整温度、IPTG浓度、诱导时间以及更换表达宿主等方法,可以减少包涵体的产生,从而提高可溶性蛋白的比例,进而简化后续的纯化步骤。


通过上述策略的综合应用,可以有效提高合成蛋白的纯度至90%以上。如果您的实验对蛋白纯度有着明确要求,请提前告知我们。
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