蛋白是否表达是分析蛋白的前提。若目的蛋白表达,接下来就会去关心目的蛋白究竟表达量如何。如何进行定量?也是实验的一个关键点。因此,检测蛋白表达水平对于研究生命科学具有重要的意义,那么蛋白表达常用的检测方法有哪些呢?今天小编在下面给大家做详细的解答。
一:免疫组化法(IHC)
免疫组化法是一种在组织或细胞水平上检测蛋白表达的方法,该方法是利用已知的特异性抗体或抗原能特异性结合的特点,再通过化学反应使标记抗体的显色剂显色,从而对组织细胞内的抗原(主要为蛋白质)进行定性、定位及相对定量研究。
二:免疫印迹法 (WB)
又称蛋白质印迹,利用 SDS-PAGE 技术将蛋白质按分子量的大小进行分离,然后用电转移的方法将蛋白转移到固相膜上,以固相膜上的蛋白质作为抗原,与对应的抗体(一抗)结合,再与酶标记的第二抗体(一抗抗体)结合,通过检测二抗的标记信号进而检测到目的蛋白。这种方法具有高灵敏度和高特异性,可以检测较低浓度的蛋白质;
三:酶联免疫吸附技术(ELISA)
ELISA是目前应用最广泛的一类免疫检测技术,是将抗原或抗体吸附在固相载体表面,加入酶标抗体(或酶标抗原)与相应抗原(或抗体)特异结合,使酶也结合到载体上,洗去游离的酶标抗体(或酶标抗原),加入底物显色,根据颜色有无和深浅进行定性或定量分析,可测至皮摩尔(pmol)级别。
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