多肽合成的原理是通过化学手段将氨基酸的羧基与氨基进行缩合反应,形成肽键。这一反应通常称为肽键形成反应或肽键合成反应。
1、保护基团引入:氨基酸α-氨基和侧链官能团需要被保护,是为了防止在反应过程中出现意外的化学反应,一般采用保护基团来对氨基酸起到保护作用;
2、活化:保护好的氨基酸需要被活化,使其具有反应性,以便于下个氨基酸来进行缩合反应,常用的活化试剂有碳酸二(二苯基)酯和羟基苕酸等;
3、缩合反应:活化的氨基酸与下个保护好的氨基酸来进行缩合反应,形成一个全新的肽键,反应条件也可以采用水溶液相或
固相合成方法,在水溶液相生成中,反应通常是在有机溶液中进行,加入适量碱催化剂,在固相生成中,氨基酸被固定于固相
支持上,反应在固相中进行;
4、重复缩合反应:根据多肽编码序列的长度,重复来进行缩合反应,逐渐扩大多肽链的长度;
5、去除保护基团:完成多肽合成后,必须要去除保护基团,恢复正常氨基酸自由官能团;
6、纯化分析:生成得到的多肽进行纯化,一般采用色谱技术来分离和纯化多肽,分离纯化后,可以用质谱等方式进行结构类型分析
和确认。
多肽合成的具体步骤和条件会因不同的合成方法和实验室的实际情况而有所不同,现代多肽合成技术还包括固相合成、液相合成、液-液相合成等不同的合成策略,使得多肽合成更加高效和灵活。
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