酵母表达是指以酵母细胞为宿主来表达和生产大量的蛋白质,酵母蛋白表达也是生物技术领域中常用的技术手段之一,通过酵母表达系统可以高效地表达重组蛋白,那么酵母蛋白表达步骤有哪些呢?今天小编在下面给大家做详细的解答。
1.选择合适的载体:找到适合酵母宿主的载体,一般是pYES2或pPICZα等。
2.克隆基因:将要表达的基因插入到载体的限制性酶切位点上,构建重组质粒。
3.转化酵母:重组质粒经过酵母细胞质膜的转录进入到细胞质,借助蛋白质互作关系进入到细胞核。
4.获得高表达克隆:经过筛选和挑选,可以获得高表达克隆。
5.诱导表达:经过培养,达到适用于期待蛋白质大量表达出来的条件,即在合适的诱导剂的作用下表达重组蛋白,不断产生目标蛋白。
6.分离和纯化:通过不同的方法和技术,将比较复杂的酵母系统中的重组蛋白分离和纯化出来。