在多肽固相合成中,肽键的形成是有一定条件的。首先为保证能够得到单一的多肽,必须要求每一步的缩合尽可能完全,不仅反应速度要快,更重要的是保护基和肽与树脂的连接在整个肽键形成过程中的稳定;再者,必须将羧基活化才能形成酰胺键,通常可以将羧基活化成酰氯、活泼酯、酸酐等。下面介绍两种常用的接肽方法:
1.原位法
又称为DCC法,它是直接加入DCC(二环己基碳二亚胺)和保护氨基酸到树脂中进行反应的方法。优点是操作简便,反应速度快,产率高,但是缺点也很明显,副产物DCU在溶剂DCM中的溶解度很小,需消耗大量时间和溶剂进行多次洗涤,但仍旧会有少量残存于树脂孔隙中,活化和缩合在一起进行时它有连接到肽链上的可能,从而影响目标多肽的纯度。
可以说是DCC法的改进加强版。在加入羧基组分前先加入DCC的反应步骤,活化中间体一部分由羧基先与DCC反应生成对称酸酐,产物纯度好,反应后的产物不存在副产物DCU,反应速度快且对称酸酐可以以结晶的形式存在,利于保存。对称酸酐法也有缺陷,由于制备一分子酸酐需要两分子的保护氨基酸,因此保护氨基酸的用量比较大,另外,这种方法对树脂溶胀性的要求也比较高。
肽键的形成是蛋白质分子结构的基础,它不仅决定了蛋白质的二级结构,还影响了蛋白质的三级结构和功能。因此,对肽键的研究具有重要的理论和应用价值。